大鼠膿毒癥模型是膿毒癥研究中的重要工具，借此模型的研究成果有望指導(dǎo)臨床，提高治療水平。

大鼠膿毒癥模型SOP：

背景：盲腸結(jié)扎穿孔模型（CLP）模型是接近于人類(lèi)膿毒癥機(jī)制的模型，被稱(chēng)為膿毒癥模型的“金標(biāo)準(zhǔn)"。CLP 技術(shù)在20世紀(jì)70年代被建立。CLP 模型非常適宜用于防治膿毒癥或膿毒性休克新藥的臨床前觀察。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：

品系：SD大鼠；性別：雄性；周齡：6-8周；體重：180-220g。

操作流程：

1）動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)7天；

2）盲腸結(jié)扎穿刺（Cecal ligation and puncture, CLP）建立膿毒癥大鼠模型：麻醉 ，做腹部正中切口尋找盲腸，分離腸系膜后在盲腸中點(diǎn)結(jié)扎，后在結(jié)扎位置至盲腸遠(yuǎn)端的中點(diǎn)用 20G針做貫通穿刺，擠出少許糞便置于盲腸表面，將盲腸回納腹腔并關(guān)腹。皮下注射鎮(zhèn)痛藥并放回籠中。

模型嚴(yán)重程度

盲腸結(jié)扎位置是CLP模型中死亡率和疾病嚴(yán)重程度的最主要決定因素。結(jié)論為：① 低位CLP或以下的死亡率幾乎為零，為輕度膿毒癥；② 中位CLP（50%～60%）的術(shù)后死亡率為30%，為中度膿毒癥；③ 高位CLP（75%）的大鼠在術(shù)后7d內(nèi)全部死亡，為重度膿毒癥。而在不同程度膿毒癥中，死亡主要集中在最初的48 h內(nèi)。

模型評(píng)估

1. 觀察大鼠的行為和生理反應(yīng): 外觀、自主意識(shí) 、自主活動(dòng)、  對(duì)外界刺激的反應(yīng)、 眼睛是否有分泌物、 呼吸頻率和質(zhì)量、etc..；

2. 全血的菌落總數(shù)的單位CFU(Colony-Forming Units，菌落形成單位)； 

3. 血清指標(biāo) 在手術(shù)后的0-72小時(shí)內(nèi)，可以檢測(cè)血液相關(guān)反映炎癥水平和臟器損傷情況： 天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶(AST) Bing氨酸轉(zhuǎn)移酶(ALT) 、肌酸激酶(CK)、 乳酸脫氫酶(LDH) 、血肌酐（CR）、血尿素氮(BUN)  、TNF-α、IL-6、etc.^[1,2,3]；

4. 組織病理?yè)p傷檢測(cè) 通過(guò)肺、肝、腎組織石蠟切片進(jìn)行糖原/HE.染色，可以觀察組織病理?yè)p傷的情況。例如，盲腸結(jié)扎穿刺法構(gòu)建的膿毒血癥大鼠模型會(huì)發(fā)現(xiàn)腎小管上皮細(xì)胞膨脹、刷狀緣缺失、空泡變性、壞死、管型形成和細(xì)胞脫落等病理改變^[1,2,3]。

多方面的指標(biāo)檢測(cè)有助于評(píng)估膿毒癥大鼠的病理生理狀態(tài)、嚴(yán)重程度和模型的有效性。

1.Mitchell PS, Parkin RK, Kroh EM, Fritz BR, Wyman SK, Tewari M et al.Circulating microRNAs as stable blood-based markers for cancer detection. Proc Natl Acad Sci. 2008; 105: 10513-8.

2. Xiao B, Wang Y, Li W, Baker M, Guo J, He YW. Plasma microRNA signature

as a non-invasive biomarker for acute graft-versus-host disease. Blood. 2013;

122: 3365.

3. Yamaguchi T, Izumi Y, Nakamura Y, Yamazaki T, Shiota M, Iwao H. Repeated remote ischemic conditioning attenuates left ventricular remodeling via exosome-mediated intercellular communication on chronic heart failure after myocardial infarction. Int J Cardiol. 2015; 178: 239-46